野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃化學(xué)成分及抗氧化活性比較

　　摘 要：比較了野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃子實(shí)體乙醇提取物抗氧化活性和化學(xué)成分的差異，探討其高抗氧化能力的來(lái)源。以二苯基三硝基苯肼自由基(DPPH)清除率、超氧陰離子清除率和 β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)作為抗氧化的指標(biāo)比較其抗氧化活性差異。結(jié)果表明，桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃均具有很強(qiáng)的抗氧化活性，楊樹(shù)桑黃的抗氧化活性顯著強(qiáng)于桑樹(shù)桑黃;楊樹(shù)桑黃醇提物的總黃酮和總多酚含量均高于桑樹(shù)桑黃醇提物。通過(guò)超高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法(UPLC-Triple-TOF-MS)比較了桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃乙醇提取物成分差異，桑樹(shù)桑黃中共鑒定出 19 種多酚類物質(zhì)，楊樹(shù)桑黃中除了與桑樹(shù)桑黃中相同的 19 種物質(zhì)，還另外分析出 3 種多酚類物質(zhì)。

　　本文源自呂國(guó)英; 宋婷婷; 蔡為明; 張作法， 菌物學(xué)報(bào) 發(fā)表時(shí)間：2021-05-20《菌物學(xué)報(bào)》(雙月刊)(英文刊名Mycosystema)的前身為《真菌學(xué)報(bào)》，創(chuàng)刊于1982年，是由中國(guó)科學(xué)院主管、中國(guó)菌物學(xué)會(huì)主辦的我國(guó)菌物學(xué)(真菌、粘菌、卵菌)領(lǐng)域的專門學(xué)術(shù)期刊。《菌物學(xué)報(bào)》報(bào)道該領(lǐng)域的最新研究進(jìn)展和具創(chuàng)造性或較高學(xué)術(shù)水平的論文和簡(jiǎn)報(bào)。已在國(guó)內(nèi)外學(xué)術(shù)界享有較高的聲譽(yù)，對(duì)繁榮和發(fā)展我國(guó)真菌科學(xué)并與國(guó)際接軌作出了積極貢獻(xiàn)。

　　關(guān)鍵詞：桑黃，抗氧化，化學(xué)成分，超高效液相色譜串聯(lián)三重四級(jí)桿飛行時(shí)間質(zhì)譜法

　　亞健康狀態(tài)使機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生大量過(guò)剩的活性氧自由基，造成機(jī)體組織細(xì)胞中生物大分子發(fā)生變形、交聯(lián)、斷裂等現(xiàn)象，從而造成氧化損傷，引起各種疾病(Durazzo et al. 2019)。為了達(dá)到預(yù)防和緩解各類疾病的目的，生物體需要從外界攝入一些有效的抗氧化劑，從而使機(jī)體的抗氧化水平得到顯著提升。開(kāi)發(fā)天然高效的抗氧化劑不僅對(duì)預(yù)防和治療各種自由基引起的疾病具有深遠(yuǎn)的意義，還能夠避免人工合成抗氧化劑產(chǎn)生的毒副作用(Hu et al. 2009)。

　　桑黃是一種珍貴的多年生大型藥用木腐真菌，被現(xiàn)代人稱為“森林黃金”。桑黃在我國(guó)已有 2 000 年的應(yīng)用歷史，最早以“桑耳”之名出現(xiàn)在《神農(nóng)本草經(jīng)》上。桑黃這一名稱最早出現(xiàn)在唐初的《藥性論》，在明代的《本草綱目》及其他醫(yī)書也有記載，并一直沿用至今。除中國(guó)古籍記載外，朝鮮 500 年前的醫(yī)書《鄉(xiāng)藥集成方》和 400 年前的醫(yī)書《東醫(yī)寶鑒》皆稱桑黃如靈丹妙藥。多處古籍記載說(shuō)明了桑黃作用之大，被世人所認(rèn)可。

　　桑黃名稱及其藥用在中國(guó)流傳千年以上，在日、韓使用也達(dá)數(shù)百年，但真正的桑黃種類及學(xué)名長(zhǎng)久以來(lái)并沒(méi)有定論。有鑒于前期真正的桑黃種類未理清，不同桑黃之間的比較研究更沒(méi)法開(kāi)展。直到 2012 年吳聲華博士等通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)真正的桑黃是未曾發(fā)表過(guò)的新種，分布于中國(guó)大陸、日本、韓國(guó)以及中國(guó)臺(tái)灣地區(qū)，野外僅生長(zhǎng)在桑屬植物樹(shù)干(Wu et al. 2012)。Zhou et al.(2016)通過(guò)序列分析及形態(tài)特征將桑黃類群重新進(jìn)行歸類，建立桑黃孔菌新屬，并命名為 Sanghuangporus Sheng H. Wu W. Zhou & Y. C. Dai。目前，桑黃類群包括了 13 個(gè)種，我國(guó)存在 8 個(gè)種，廣泛分布與寒溫帶至熱帶地區(qū)，但部分種類僅分布于特定區(qū)域且與特定宿主植物形成嚴(yán)格的寄生關(guān)系(朱琳和崔寶凱 2016)，同時(shí)具有明顯的地域特色。吳長(zhǎng)生(2011)對(duì)天然野生桑黃和人工培養(yǎng)桑黃 95%乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究，共分離得到 57 個(gè)化合物，包括 4 個(gè)新芐基二氫黃酮。張俊峰等(2020)比較了桑黃菌絲體和子實(shí)體 4 個(gè)萃取相在抗氧化、抗腫瘤與化學(xué)成分上存在的差異，提出發(fā)酵菌絲體在抗氧化活性方面具有替代子實(shí)體的可行性。

　　桑樹(shù)桑黃 Sanghuangporus sanghuang 和楊樹(shù)桑黃 S. vaninii 是目前研究和開(kāi)發(fā)最好的兩種桑黃。然而外觀似桑黃的種類很多，真正的野生桑樹(shù)桑黃的數(shù)量很少，如外觀類似的楊樹(shù)桑黃，在野外的數(shù)量約為桑樹(shù)桑黃的百倍，且市場(chǎng)價(jià)格比桑樹(shù)桑黃低很多。但是到目前為止，野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃在抗氧化活性及活性成分的差異方面鮮有系統(tǒng)的研究。本研究對(duì)野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物抗氧化活性進(jìn)行比較，并對(duì)其活性成分進(jìn)行系統(tǒng)鑒定，為其后續(xù)的開(kāi)發(fā)和研究奠定基礎(chǔ)。

　　1 材料與方法

　　1.1 供試材料

　　桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃子實(shí)體選用千島湖野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃。并利用 ITS 序列信息對(duì)桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃進(jìn)行過(guò)分子生物學(xué)鑒定。經(jīng) 60℃干燥、粉碎后，過(guò) 120 目備用。福林‐酚試劑(Folin‐Ciocalteu)、蘆丁、 1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、丁基羥基茴香醚(BHA)、鄰苯三酚、亞油酸、β-胡蘿卜素購(gòu)自 Sigma，其余化學(xué)試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純或色譜純。

　　1.2 提取物的制備

　　取粉碎好的桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃各 50g，加入 1 500mL 70%乙醇，超聲提取 30min，提取結(jié)束后，過(guò)濾，殘?jiān)偌尤?1 500mL 70% 乙醇超聲提取一次，合并濾液，真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，進(jìn)一步冷凍干燥，得到提取物。

　　1.3 活性成分含量測(cè)定

　　多酚含量 ： 根據(jù)張 梅梅等( 2011) Folin-Ciocalteu方法略加改動(dòng)，測(cè)定多酚含量。以沒(méi)食子酸濃度為橫坐標(biāo)，波長(zhǎng) 750nm 下吸光值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為： y=7.7925x+0.0115，相關(guān)系數(shù) R 2 =0.9982。

　　總黃酮含量：根據(jù) Zhuang et al.(2018)的方法測(cè)定黃酮含量。以蘆丁濃度為橫坐標(biāo)，波長(zhǎng) 510nm 下吸光值為縱坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為： y=1.927x+0.117，相關(guān)系數(shù) R 2 =0.9935。

　　1.4 抗氧化活性分析

　　1.4.1 DPPH 自由基清除能力：取 2mL(不同濃度)樣品液置于 10mL 離心管中，加入 2mL 現(xiàn)配的 0.1mmol/L 的 DPPH 甲醇溶液，混合均勻后，在室溫下置于暗處?kù)o置 30min，于 517nm 處測(cè)定吸光度(Locatelli et al. 2009)。

　　1.4.2 超氧自由基清除能力：取 4.5mL 的緩沖液于 10mL 具塞試管中，20℃水浴中預(yù)熱20min 后，分別加入不同濃度的提取液 1mL 和 25mmol/L 鄰苯三酚溶液 0.4mL，搖勻后用蒸餾水稀釋至刻度。置于 25℃水浴中反應(yīng) 5min，取出后加入 8mol/L HCL 溶液 1mL，終止反應(yīng)。于 299nm 處測(cè)定吸光度(Li 2012)。 1.4.3 β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)：向燒瓶中加入 20mg 亞油酸，20mg 吐溫-40，然后加入 1mL β-胡蘿卜素的氯仿溶液(0.1mg/mL)，45℃下旋轉(zhuǎn)真空蒸發(fā)器中蒸發(fā)掉氯仿液，然后緩慢向半固殘?jiān)屑尤?50mL 去離子水，邊加邊劇烈震搖燒瓶，形成乳濁液，備用。試管中加入 0.2mL 樣品溶液(提取物，BHA)，加入 5mL 乳濁液，搖勻后在 470nm 下測(cè)定吸光度，以不含 β-胡蘿卜素的乳濁液作為空白對(duì)照，試管在 50℃水浴中放置，吸光度每 15min 測(cè)定一次，記錄至 180min(Yuan et al. 2017)。

　　1.5 UPLC-Triple-TOF/MS 定性分析

　　1.5.1 測(cè)定液的制備：桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物各 1g 溶于 30mL 70%甲醇溶液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇后，用等量的乙酸乙酯進(jìn)行萃取，乙酸乙酯萃取液蒸干后，加入 5mL 甲醇溶解，進(jìn)行 UPLC-Triple-TOF/MS 定性分析。

　　1.5.2 色譜條件：色譜柱為沃特世 ACQUITY UPLC HSS T3(150mm×2.1mm i.d.，1.7µm);以 0.1%甲酸溶液為流動(dòng)相 A，以 0.1%甲酸乙腈為流動(dòng)相 B，線性梯度洗脫，0min 10%B; 2min 20% B;25min 35% B;35min 95% B; 37min 95% B;流速為 0.3mL/min;進(jìn)樣量： 2µL。

　　質(zhì)譜條件：UPLC-Triple-TOF 5600+飛行時(shí)間液質(zhì)聯(lián)用儀：負(fù)離子掃描模式;掃描范圍： m/z 100-1500;霧化氣(GS1)：55psi;霧化氣(GS2)：55psi;氣簾氣(CUR)：35 psi;離子源溫度(TEM)：550V(負(fù));離子源電壓(IS)： -4 500V(負(fù));一級(jí)掃描：去簇電壓(DP)： 100V;聚焦電壓(CE)：10V;二級(jí)掃描：使用 TOF MS-Product Ion-IDA 模式采集質(zhì)譜數(shù)據(jù)，CID 能量為-20、-40 和-60V。

　　1.6 統(tǒng)計(jì)方法

　　所有計(jì)量數(shù)據(jù)均表示為?X±SD，采用 SPSS 軟件進(jìn)行單因素方差分析及 q 檢驗(yàn)法進(jìn)行檢驗(yàn)，以 P<0.05 為顯著差異。

　　2 結(jié)果與分析

　　2.1 多酚與黃酮含量

　　多酚是一類芳香族衍生物的總稱，廣泛存在于植物和真菌中。它是一種很好的電子供體，通過(guò)與自由基或金屬離子等發(fā)生反應(yīng)，可以阻斷脂質(zhì)的過(guò)氧化作用(Martini et al. 2017)。黃酮作為穩(wěn)定的自由基清除劑是在自然界中普遍存在的一類化合物(Chen et al. 2016)。

　　圖 1 野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物中黃酮和多酚的含量 數(shù)據(jù)均為測(cè)定 3 次的結(jié)果，表示為“平均值±標(biāo)準(zhǔn)差”，同一列不同字母代表數(shù)值間差異顯著(P<0.05)

　　野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃子實(shí)體經(jīng) 70%乙醇提取，經(jīng)分析，桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物中黃酮類含量分別達(dá)到了(10.18±0.85)% 和(13.58±1.33)%，多酚含量分別達(dá)到了(14.62± 1.05)%和(15.38±0.76)%。楊樹(shù)桑黃中多酚含量略高于桑樹(shù)桑黃，黃酮含量顯著高于桑樹(shù)桑黃。

　　2.2 DPPH 自由基清除活性

　　桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取液的 DPPH 自由基清除活性見(jiàn)圖 2。隨著濃度的增加，桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物和抗氧化劑 BHA 的 DPPH 自由基清除率先不斷增加再趨于平緩。其中楊樹(shù)桑黃提取物對(duì) DPPH 自由基的清除率要顯著高于桑樹(shù)桑黃提取物。在濃度達(dá)到 1.6mg/mL 時(shí)，楊樹(shù)桑黃提取物與 BHA 清除效果相當(dāng)。抗氧化劑主要通過(guò)兩種機(jī)制發(fā)揮作用：作為氫原子供體和作為電子供體。已知酚類物質(zhì)是優(yōu)良的氫原子和電子供體，并能形成穩(wěn)定的自由基中間物，因此酚類物質(zhì)在抗氧化活性中發(fā)揮重要作用。

　　2.3 超氧陰離子清除能力

　　不同濃度的桑樹(shù)桑黃提取物、楊樹(shù)桑黃提取物和 BHA 都具有一定的清除超氧陰離子的能力(圖 3)。在濃度為 0.1 和 0.2mg/mL 時(shí)，楊樹(shù)桑黃提取物與桑樹(shù)桑黃提取物超氧自由基的清除能力不顯著。當(dāng)濃度達(dá)到 0.4mg/mL 時(shí)，桑樹(shù)桑黃提取物、楊樹(shù)桑黃提取物和 BHA 對(duì)超氧陰離子清除能力差別顯著，分別為 78.4%、84.1%和 99.0%。

　　2.4 β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)

　　β-胡蘿卜素、亞油酸共氧化試驗(yàn)中各樣品的抑制活性見(jiàn)圖 4。各樣品的吸光度顯著下降并最后趨于平緩。在反應(yīng)的 120min 內(nèi)，桑樹(shù)桑黃提取物、楊樹(shù)桑黃提取物和 BHA 的吸光度分別從 0.36、0.37 和 0.39 下降到 0.15、 0.19 和 0.27。實(shí)驗(yàn)結(jié)果與其他抗氧化活性評(píng)價(jià)的結(jié)果相似，楊樹(shù)桑黃提取物的抗氧化活性顯著高于桑樹(shù)桑黃提取物。

　　2.5 桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃醇提物的化學(xué)組成比較

　　采用 UPLC-Triple-TOF/MS 對(duì)桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃乙醇提取物進(jìn)行定性分析，主要依據(jù)質(zhì)譜分子離子峰及離子碎片數(shù)據(jù)，結(jié)合 Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索信息和文獻(xiàn)檢索等信息。桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃醇提物液相色譜圖見(jiàn)圖 5，主要化合物結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖 6。

　　成分 1：出峰時(shí)間為 2.51，[M-H]-為 m/z 153.0215，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C7H6O4，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，109 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為原兒茶酸(3,4-dihydroxybenzoic acid)。

　　成分 2：出峰時(shí)間為 3.24，[M-H]-為 m/z 137.0265，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C7H6O3，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，119、108 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羥基和醛基，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為原兒茶醛(3,4-dihydroxybenzaldehyde)。

　　成分 3：出峰時(shí)間為 4.13，[M-H]-為 m/z 423.0704，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C22H16O9，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，379、335 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 phellibaumin B。該化合物是從暴馬丁桑黃中發(fā)現(xiàn)的由 hispidin 衍生的一種多酚類化合物。

　　成分 4：出峰時(shí)間為 5.11，[M-H]-為 m/z 177.0571，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C10H10O3，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，159、135 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羰基和羥基，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為桑黃素 C(4-(3,4-dihydroxyphenyl)-3- buten-2-one)。該化合物同樣擁有鄰二酚的母核結(jié)構(gòu)，也具有很強(qiáng)的抗氧化活性。

　　成分 5：出峰時(shí)間為 5.67，[M-H]-為 m/z 245.0455，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C13H10O5，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，201、159 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羰基、羥基等結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 hispidin。

　　成分 6：出峰時(shí)間為 6.98，[M-H]-為 m/z 975.1397，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C52H32O20，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，931 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 phelligridimer A 或其異構(gòu)體。phelligridimer A 是 hispidin 衍生物，其有很強(qiáng)的抗氧化作用(Wang et al. 2005)

　　成分 7：出峰時(shí)間為 7.34，[M-H]-為 m/z463.1016，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C25H20O9，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，405、379、 335、135 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在苯并乙烯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為骨碎補(bǔ)內(nèi)酯(davallialactone)。此化合物也是也是 hispidin 衍生物，其有很強(qiáng)的抗氧化作用(Yang et al. 2013)。

　　成分 8：出峰時(shí)間為 7.62，[M-H]-為 m/z 975.1406，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C52H32O20，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，931 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，相對(duì)含量判斷，推測(cè)該化合物為 phelligridimer A。

　　成分 9：出峰時(shí)間為 7.87，[M-H]-為 m/z463.1014，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C25H20O9，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，405、379、 335、135 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在苯并乙烯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 davallialactone 異構(gòu)體。

　　成分 10：出峰時(shí)間為 10.66，[M-H]-為 m/z489.0807，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C26H18O10，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，445、403、 135 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在苯并乙烯和羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 hypholomine B。hypholomine B 作為一種多酚類化合物，具有很強(qiáng)的抗氧化活性(Jun et al. 2008)。

　　成分 11：出峰時(shí)間為 12.20，[M-H]-為 m/z489.0811，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C26H18O10，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，445、403、 135 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在苯并乙烯和羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 hypholomine B 異構(gòu)體。

　　成分 12：出峰時(shí)間為 13.01，[M-H]-為 m/z489.0808，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C26H18O10，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，445、403、 135 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在苯并乙烯和羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù) 據(jù) 庫(kù) 檢 索 ， 推 測(cè) 該 化 合 物 為 桑 黃 素 L(3,14’-bihispidinyl)。3,14’-bihispidinyl 作為一種 hispid 的衍生物，具有很強(qiáng)的抗氧化活性(Jun et al. 2008)。

　　成分 13：出峰時(shí)間為 13.95，[M-H]-為 m/z461.0866，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C25H18O9，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，417 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為纖孔菌素 A(inoscavin A)。

　　成分 14：出峰時(shí)間為 14.83，[M-H]-為 m/z733.1187，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C39H26O15，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，689、645 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 phellinstatin。Phellinstatin是擁有多個(gè)酚羥基的多酚化合物，具有很強(qiáng)的抗氧化活性(Jun et al. 2008)。

　　成分 15：出峰時(shí)間為 14.9，[M-H]-為 m/z473.0502，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C25H14O10，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，458、445 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為桑黃素 E(phelligridin E)。

　　成分 16：出峰時(shí)間為 16.02，[M-H]-為 m/z733.1187，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C39H26O15，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，689、645 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 phellinstatin 異構(gòu)體。

　　成分 17：出峰時(shí)間為 16.31，[M-H]-為 m/z379.0447，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C20H12O8，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，335、307 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為桑黃素 D(phelligridin D)。

　　成分 18：出峰時(shí)間為 16.95，[M-H]-為 m/z379.0450，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C20H12O8，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，335、307 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，推測(cè)該化合物為 phelligridin D 的異構(gòu)體。

　　成分 19：出峰時(shí)間為 18.71，[M-H]-為 m/z623.0814，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C33H20O13，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，579 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間，推測(cè)該化合物為 inonobulin A。 Inonobulin A 是一種擁有多個(gè)酚羥基的多酚類化合物。

　　成分 20：出峰時(shí)間為 20.83，[M-H]-為 m/z363.0502，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C20H12O7，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，335 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間，推測(cè)該化合物為 meshimakobnol B(Nagatsu et al. 2004)。

　　成分 21：出峰時(shí)間為 27.0，[M-H]-為 m/z621.0665，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C33H18O13，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，577 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間，推測(cè)該化合物為桑黃素 H(phelligridin H)(Zheng et al. 2011)。

　　成分 22：出峰時(shí)間為 28.28，[M-H]-為 m/z459.0711，根據(jù)高分辨質(zhì)譜結(jié)果擬合的分子式為 C25H16O9，根據(jù)二級(jí)質(zhì)譜，415、373 等碎片離子，推測(cè)結(jié)構(gòu)中存在羧基或者內(nèi)酯結(jié)構(gòu)，根據(jù) Scifinder 和 Reaxy 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索，根據(jù)相對(duì)保留時(shí)間，推測(cè)該化合物為桑黃素 L(phelligridin L)(Zheng et al. 2011)。

　　3 討論

　　桑樹(shù)桑黃只生活在活體桑樹(shù)上，目前還很難栽培，野生數(shù)量也很有限;楊樹(shù)桑黃野生較多，人工栽培也已經(jīng)比較成熟，市面上所謂的栽培桑黃子實(shí)體，大都是楊樹(shù)桑黃(吳聲華和戴玉成 2020)。

　　本研究中，桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃子實(shí)體選用千島湖采集的野生桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃，并經(jīng)過(guò)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)確定。采用 DPPH 方法，超氧陰離子清除實(shí)驗(yàn)和 β-胡蘿卜素漂白實(shí)驗(yàn)對(duì)桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物的抗氧化活性進(jìn)行研究，研究發(fā)現(xiàn)桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃均具有很強(qiáng)的抗氧化活性，楊樹(shù)桑黃的抗氧化活性顯著強(qiáng)于桑樹(shù)桑黃。

　　桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物的抗氧化活性與其活性成分是分不開(kāi)的，本研究采用UPLC-Triple-TOF/MS 對(duì)桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物中的活性成分進(jìn)行了定性分析。桑樹(shù)桑黃中共鑒定出 19 種活性物質(zhì)，大多數(shù)是 hispidin 的衍生物;而在楊樹(shù)桑黃提取物中，除了發(fā)現(xiàn)的這 19 種活性物質(zhì)外，還發(fā)現(xiàn)了 meshimakobonl B，桑黃素 H 和桑黃素 L。這些化合物都為多酚類物質(zhì)，其中大部分活性物質(zhì)的抗氧化活性都有報(bào)道(Ei-Sonbaty et al. 2019;Kim et al. 1999)。研究發(fā)現(xiàn)這些化合物中很多都含有鄰苯二酚的母核結(jié)構(gòu)，這些基團(tuán)是其顯著抗氧化活性的物質(zhì)基礎(chǔ)(Jeong et al. 2009)。Hispidin 是真菌中常見(jiàn)的具有抗氧化作用的多酚類化合物。以 hispidin 為關(guān)鍵前體物質(zhì)合成的衍生物在大型藥用真菌中普遍存在，大部分具有較強(qiáng)的抗氧化、抗炎以及抗腫瘤等活性(Park et al. 2004)。

　　在桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃提取物中鑒定的化合物有多個(gè)是 hispidin 及其衍生物。因此，這些物質(zhì)在桑黃提取液的抗氧化活性中起到很重要的作用。黃酮作為桑黃的標(biāo)志性成分之一，有報(bào)道桑黃中的黃酮類化合物有櫻花亭、柚皮素、7-甲基圣草素、芫花素和甲基桑黃黃酮等(史幀婷和包海鷹 2016;莫順燕等 2003)，但在本研究中并沒(méi)有鑒定出。陳萬(wàn)超等(2020)對(duì)近 5 年從桑黃類真菌中分離得到的多酚類化合物及其活性進(jìn)行了綜述，沒(méi)有典型黃酮類物質(zhì)被分離鑒定出來(lái)。造成這些差異的原因一方面可能在于以前桑黃菌屬分類比較混亂，不同藥用木生真菌種類自身所具有的藥用次生代謝產(chǎn)物的合成基因簇不同，另一方面也可能是桑樹(shù)桑黃和楊樹(shù)桑黃自身生長(zhǎng)狀態(tài)和寄生樹(shù)種種存在差異。