HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官系統損害

　　摘　要　目的　分析HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統損害的相關性，探討系統性紅斑狼瘡(SLE)從基因到臨床表達的發病機制。方法　應用PCR-SSOPH技術檢測113例確診SLE病人的DR、DQA1、DQB1等位基因。結果　漿膜炎與DQB1*0601正相關;神經精神癥狀與DRB1*1501正相關;血肌酐增高與DQB1*0302、DQB1*0401正相關;血尿素氮增高與DQB1*0201負相關;蛋白尿與DQB1*0301、DRB3*0202、DRB3*0301、DRB1*1101負相關;血尿與DQB1*0301、DRB3*0301負相關;管型尿與DRB1*0302正相關;貧血和白細胞減少分別與DQB10201正相關;血小板減少與DRB1*1502和DRB1*1202正相關;淋巴細胞減少與DRB1*0302正相關;C3降低與DQB1*0303正相關，與DQB1*0301負相關;狼瘡細胞陽性與DRB1*1501負相關。結論　多個HLA-Ⅱ類等位基因和SLE的臨床表達有相關性，國人的SLE遺傳背景與其他人種有所不同。

　　關鍵詞：紅斑狼瘡，系統性;HLA抗原;多態現象(遺傳學);易感性與特異性;等位基因

　　系統性紅斑狼瘡(SLE)發病與多種HLA等位基因相關。為深入探討這些基因或其關聯的亞型與SLE臨床表達關系，我們引入PCR-SSOPH檢測技術，對113例確診的SLE病人進行HLA-DR、DQ位點等位基因分型，分析基因與狼瘡性器官、系統損害的相關性，找出重型SLE相關基因。

　　1　資料與方法

　　1.1　病例選擇：入選的113例患者均符合1982年美國風濕病協會(ARA)SLE診斷標準4條或4條以上[1]。記錄患者的性別、發病年齡，以及有無以下SLE臨床表現：蝶型紅斑、盤狀損害、光敏、口腔潰瘍、關節炎、雷諾現象、狼瘡發、神經精神癥狀、漿膜炎、血細胞減少、狼瘡腎炎和C3降低(<0.8 g/L)等。

　　標本：外周靜脈血5 ml(抗凝)。

　　1.2　實驗方法：①基因組DNA的提取：鹽析法。②DNA體外擴增—聚合酶鏈反應(PCR)。共有6對引物，其中AMP-B為DR位點擴增的公用引物。③地高辛(DIG)—ddUTP3′末端標記寡核苷酸探針雜交。

　　1.3　分型標準：以顯著影響生存率的惡性指標作為重型SLE分型標準[2]。

　　1.4　統計學處理：χ2相關分析、多因素回歸分析和多項比較校正，以P<0.05為具統計學顯著性。

　　2　結　　　果

　　2.1　HLA-Ⅱ類基因分型

　　2.1.1　等位基因分型結果：用12個DQA1探針檢出7個亞型，未檢出DQA1*0401;用15個DQB1探針檢出12個等位基因，未檢出DQB1*0504、*0603和*0604;用4個DR2探針檢出4個亞型：用4個DR52組探針檢出3個亞型，未檢出DRB3*0201;用8個DR52相關組探針分出8個亞型。

　　2.1.2　H-W吻合度檢測結果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值與觀察值很好吻合，分別P>0.1和P>0.5，說明基因已達到遺傳平衡，本組病人可作為可靠的供研究的群體資料。

　　2.2　HLA-Ⅱ類等位基因與SLE器官、系統損害的相關性(見表1)

　　2.2.1　HLA-DQA1位點等位基因：DQA1*0101與淋巴細胞減少正相關;DQA1*0102與狼瘡細胞陽性負相關;DQA1*0501與蛋白尿負相關，Pc(多項比較校正P值)>0.05。

　　2.2.2　HLA-DQB1位點等位基因：HLA-DQB1*0201與貧血和白細胞減少正相關，與血尿素氮增高負相關;DQB1*0302與血肌酐增高正相關;DQB1*0303與C3降低正相關;DQB1*0401與血肌酐增高正相關;DQB1*0602與發病年齡正相關，均分別P<0.05，Pc>0.05。

　　DQB1*0301分別與蛋白尿和血尿負相關，分別P<0.001和0.01，分別Pc<0.05和Pc>0.05;與C3降低負相關，分別P<0.05和Pc>0.05。DQB1*0601與漿膜炎正相關，分別P<0.01，Pc<0.05。

　　2.2.3　HLA-DR2組等位基因：DRB1*1501與神經精神癥狀正相關，與狼瘡細胞陽性負相關;DRB1*1502與血小板減少正相關，均分別P<0.05，Pc>0.05。

　　2.2.4　HLA-DR52組等位基因：DRB3*0202與蛋白尿負相關;DRB30301與蛋白尿和血尿均呈負相關，均分別P<0.05，Pc>0.05。

　　2.2.5　HLA-DR52相關組等位基因：DRB10302與淋巴細胞減少和管型尿正相關;DRB1*1101與蛋白尿負相關;DRB1*1202與血小板減少正相關，均P<0.05，Pc>0.05。

　　表1　HLA-DR和DQ等位基因與SLE臨床指標的相關性

　　等位基因 臨床指標 N1/N2 N3/N4 χ2值 P值 Pc值

　　DQA1*0101 淋巴細胞減少 10/64 16/49 　4.45 0.03+ >0.05

　　DQA1*0102 狼瘡細胞陽性 15/25 　2/11 　8.04 0.013- >0.05

　　DQA1*0501 蛋白尿 19/69 　5/44 　4.20 0.04- >0.05

　　DQB1*0201 貧血 　　5/51 18/62 　6.38 0.01+ >0.05

　　白細胞減少 　　8/65 15/48 　6.11 0.01+ >0.05

　　尿素氮增高 16/51 　1/11 　7.00 0.03- >0.05

　　DQB1*0301 蛋白尿 27/69 　3/44 14.39 0.000 1- <0.01

　　血尿 29/90 　1/23 　7.30 0.007- >0.05

　　C3降低 20/51 　9/55 　7.66 0.02- >0.05

　　DQB1*0302 血肌酐增高 　7/55 4/7 　8.84 0.01+ >0.05

　　DQB1*0303 C3降低 10/51 17/55 　8.50 0.01+ >0.05

　　DQB1*0401 血肌酐增高 　1/55 2/7 　8.81 0.01+ >0.05

　　DQB1*0601 漿膜炎 21/99 　8/14 　8.30 0.03+ <0.05

　　DRB1*1501 CNS損害 19/99 　5/13 　6.03 0.049+ >0.05

　　狼瘡細胞陽性 11/25 　0/11 10.96 0.01- >0.05

　　DRB1*1502 血小板減少 　0/55 　6/58 　6.01 0.01+ >0.05

　　DRB3*0202 蛋白尿 19/69 　3/44 　7.36 0.007- >0.05

　　DRB3*0301 蛋白尿 12/69 　2/44 　4.08 0.04- >0.05

　　血尿 14/90 　0/23 　4.08 0.04- >0.05

　　DRB1*0302 淋巴細胞減少 　1/64 　5/49 　4.12 0.04+ >0.05

　　管型尿 　4/104 2/9 　5.56 0.02+ >0.05

　　DRB1*1101 蛋白尿 11/69 　1/44 　5.29 0.02- >0.05

　　DRB1*1202 血小板減少 　0/55 　5/58 　4.96 0.03+ >0.05

　　注：N1：等位基因陽性+臨床指標陰性數，N2：臨床指標陰性數，N3：等位基因陽性+臨床指標陽性數，N4：臨床指標陽性數，-：負相關，+：正相關

　　此外，本研究尚發現HLA-Ⅱ類基因與多種自身抗體顯著關聯，但與性別、蝶型紅斑、盤狀損害、光敏、口腔潰瘍、關節炎、雷諾現象和狼瘡發無顯著相關。

　　2.2.6　多因素回歸分析：結果表明等位基因相互間存在復雜的交互關系，DQB1*0401和DQB1*0605分別與血肌酐增高和蛋白尿正相關，分別P<0.05。

　　3　討　　　論

　　為探討基因與SLE臨床表達關系，找出重型SLE相關基因，我們進一步分析了HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統損害的相關性。

　　3.1　腎臟損害：Fronek等[3]報道DR2與狼瘡腎炎相關，還發現稀有等位基因DQB1*0605、*0502與白人、黑人和亞洲人狼瘡腎炎顯著相關，此相關在亞洲人最顯著。Doherty等[4]報道了對南方中國人SLE的研究結果：與健康對照組比，DRw15和DQw1在狼瘡腎炎組頻率顯著增高：與非狼瘡腎炎組比，頻率無明顯增高;王敏等[5]報道，DR2和DR9同時陽性可致狼瘡腎炎風險性明顯增高;彭學標等[6]的研究結果也表明DR2陽性與江蘇地區漢族人SLE腎損害相關;但未見分析DR2亞型相關性的報道。我們的研究結果提示DQB1*0401和DQB1*0302均與血肌酐增高相關;其中DQB1*0401經多因素回歸分析保持顯著意義，因此是較為肯定的重型SLE相關基因;此外，單因素分析結果未顯示DQB1*0605與腎損害相關，但多因素回歸分析結果顯示其與蛋白尿關聯;由于DQB1*0605是稀有基因，顯然不能用它解釋SLE患者如此高的腎炎發生率;推測DQB1*0605與其他更重要的關聯基因一起介導狼瘡性蛋白尿的發生與發展。我們的研究未發現單位點DR2等位基因與腎損害關聯，它們是否通過與其他基因的組合而致腎炎易感，有待進一步研究。

　　本資料還顯示DQB1*0303與C3降低正相關。C3在自身免疫反應過程中起關鍵性作用，對腎炎的發生與發展尤為重要，早期C3降低是獨立影響SLE病人預后的惡性因素[2]。因此DQB1*0303是個重要的SLE相關基因，值得進一步探討它對SLE的標記性。

　　本研究發現某些等位基因對狼瘡腎炎具有保護性，包括DQB1*0201和*0301，分別與血尿素氮和蛋白尿負相關;其中DQB1*0301還與惡性指標C3降低負相關;文獻[7]報道DQB1*0301與SLE易感相關，但它可能是中國南方漢族人輕型SLE相關基因。

　　此外，DRB3*0202(DRw52b)、*0301(DRw52c)也與蛋白尿負相關。這與Reveille等[8]報道的美國黑人DRw52b與狼瘡腎炎高風險關聯相反。這種差異顯然與人種的遺傳背景有關。我們推測DR52組等位基因單獨不能決定狼瘡腎炎，但它們與重要的狼瘡腎炎相關基因呈連鎖不平衡，通過組合而呈現不同的功能：與致腎炎基因連鎖，功能顯示致病性;與保護性基因連鎖，顯示保護性。

　　孟煒等[9]報道DQA1*0501是SLE的保護基因，本資料也提示DQA1*0501與狼瘡腎炎低風險相關。這與國外報道DQA1*0501為SLE易感基因不一致。

　　我們先前生存率的研究結果顯示男性是獨立影響SLE病人預后的惡性因素，男性比女性更多出現管型尿[2]。但本研究未發現HLA-Ⅱ類基因在男女性之間的分布有差異。在鼠狼瘡，Yaa基因(Y染色體自身免疫反應促進基因)可顯著加速狼瘡易感鼠發病[10]，且狼瘡腎炎嚴重;在人狼瘡，是否存在具有類似功能的基因，值得深入探討。

　　3.2　中樞神經系統損害：本研究發現DRB1*1501與SLE患者的神經精神癥狀正相關，這在國內外未見有報道。Reveille等[8]的研究結果提示3.7 kb I DQαRFLP片斷與黑人SLE的神經精神癥狀負相關，并推測具有保護功能的序列在DQα分子鏈上。本研究結果未能支持這一論點。

　　3.3　血液系統損害：DQA1*0101與淋巴細胞減少相關，未見其他可比性資料供討論。DQB1*0201與貧血和白細胞減少關聯。值得注意的是DQB1*0201同時與血尿素氮增高呈強負性關聯，表明該基因主要引起血液系統損害。臨床上某些SLE病人以血液系統受累為主要表現，如嚴重貧血、血小板減少等，而其他系統損害輕或無，可能與攜帶DQB1*0201基因型有關。

　　3.4　漿膜炎：本研究結果顯示DQB1*0601與漿膜炎正相關，是重型SLE相關基因。文獻[1]報道DQB1*0601是SLE易感基因。

　　本文研究分析HLA-Ⅱ類基因與狼瘡性器官、系統損害的相關性，發現DR和DQ位點均有多個等位基因與SLE臨床指標關聯，部分顯示易感性，部分顯示保護性。結果對區分SLE臨床亞型，早期預測SLE發展趨勢具有一定的參考意義。研究結果表明，重型SLE相關基因主要為DQA1*0101、DQB1*0201、DQB1*0302、DQB1*0303、DQB1*0401、DQB1*0601和DRB1*1501，對SLE具有保護性作用的基因包括DQA1*0501、DQB1*0301、DRB3*0202和DRB3*0301等。

　　謝尚葵現為美國德克薩斯大學西南醫學中心風濕病科博士后

　　作者單位：謝尚葵(200040 上海醫科大學華山醫院皮膚科)

　　馮樹芳(200040 上海醫科大學華山醫院皮膚科)

　　沈福民(上海醫科大學公共衛生學院遺傳流行病學教研室)

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